O presente artigo traz uma análise de conteúdo das temáticas sobre Sexualidade e Gênero nos livros didáticos de Biologia, mais adotados no Ensino Médio de escolas públicas do Brasil, inclusos no Programa Nacional do Livro Didático 2015 (PNLD). Para tanto, foram analisados três livros por meio da técnica de análise de conteúdo de Bardin e uma ficha avaliativa, o que nos permitiu constatar que há uma abordagem diferenciada da temática em cada coleção variando desde de as formas gráficas até as formas textuais. Contudo, através da metodologia utilizada para tal pesquisa, foi possível constatar de uma forma elucidada que nenhuma das obras tratam sobre questões de identidade de gênero e orientação sexual de uma forma direta, mas sim de uma forma indireta através de temas transversais como sistemas genitais e DST´s. Além disso, verificou-se uma falta de contextualização dos conceitos unificadores do tema em questão em duas das três obras analisadas, o que dificulta em parte a associação do conteúdo de uma forma transversal por parte dos alunos. Além disso, foi possível constatar que em nenhuma das obras propuseram atividades práticas como, atividades em grupos/projetos o que limita de certa forma a compreensão do conteúdo apresentado por parte dos alunos, não obstante, de acordo com a pesquisa, todas as obras analisadas estão munidas de estruturas gráficas, por mais que não sejam diretamente relacionadas ao tema em questão, ainda que contemplem alguns conteúdos transversais à sexualidade e gênero, o que de certa forma contribui para a interpretação e compreensão dos alunos e professores.