Rachoviscus crassiceps (Characidae) possui distribuição geográfica restrita, ocorrendo em riachos lênticos e de águas pretas. Neste estudo foram investigados aspectos da biologia desta espécie como sexo, estrutura em comprimento e dieta, em ambientes de água escura da Mata Atlântica. A amostragem foi realizada com armadilhas do tipo covo e puçás de dezembro de 2023 a fevereiro de 2024, na sub-bacia do rio Preto, bacia do rio Itanhaém (CEUA – IB/CLP no 15/2023 e SISBIO 90241-1). Em laboratório foram mensurados quanto ao comprimento total (CT, cm), pesados (P, g), registrado o sexo e os estômagos conservados. A dieta foi quantificada pelo Grau de Preferência Alimentar (GPA). Foram coletados 24 espécimes, cinco em um riacho, seis em uma poça temporária e 13 em uma vala de estrada. A população foi composta por oito machos e seis fêmeas (1:1; p = 0,59). Em 10 espécimes, não foi possível determinar o sexo, sendo classificados como imaturos (CTmédio = 2,3 cm; dp = 0,21 cm). Os machos (CTmédio = 3,4 cm; dp = 0,3 cm) foram, em média, maiores que as fêmeas (CTmédio = 2,7 cm; dp = 0,4 cm) (t = -3,388; gl = 8,73; p = 0,008). A análise da dieta de 22 espécimes, resultou no registro de 15 itens, incluindo insetos aquáticos e terrestres, aracnídeos, ácaros e material vegetal, a maioria classificados como ocasionais (GPA < 1), destacando-se Hymenoptera, classificado como secundário (< 1 GPA < 2). Assim, a espécie apresentou hábito onívoro nos ambientes estudados, com consumo de itens autóctones e alóctones. Rachoviscus crassiceps é considerado Criticamente Ameaçado (CR) em São Paulo, Paraná e Santa Catarina e Em Perigo (EN) no Brasil. Este estudo é um passo inicial para compreender a biologia da espécie em ambientes alagáveis do sudeste do Brasil, uma região severamente ameaçada pela expansão urbana.