Ancistrus ranunculus, popularmente conhecido como “preto-velho”, é uma espécie amazônica ornamental classificada como quase ameaçada de extinção. É caracterizada por apresentar tentáculos proeminentes no focinho, traço distintivo dessa espécie. Estudos que visam à avaliação de parâmetros seminais auxiliam no entendimento das estratégias reprodutivas e sua relação com o ambiente, promovendo o desenvolvimento de protocolos e técnicas de manejo para a reprodução seminatural ou em ambiente artificial, resultando em uma conservação ex situ das espécies. Este estudo teve como objetivo caracterizar a qualidade espermática de Ancistrus ranunculus. Com a aprovação do Comitê de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal do Pará (CEUA – UFPA: 3032120919), foram utilizados 7 espécimes machos sexualmente maduros, sem aplicação de indução hormonal. No laboratório, os animais foram anestesiados com 40 mg/L de eugenol, previamente testado, e o sêmen foi coletado por meio de estimulação por massagem abdominal em sentido céfalo-caudal. A motilidade espermática foi analisada por meio de capturas de vídeo após ativação com água destilada, focando-se nos primeiros 30 segundos do movimento dos espermatozoides. As análises foram realizadas utilizando o software gratuito ImageJ, com o programa de extensão Computer Assisted Sperm Analysis (CASA), que avaliou os seguintes parâmetros espermáticos: MOT (%), VCL (?m/s), VAP (?m/s), VSL (?m/s), LIN (%), WOB (%), PROG (µm) e BCF (Hz). Os resultados indicam que a motilidade inicial de Ancistrus ranunculus é de 70,17 ± 13,96%. As velocidades VCL (148,85 ± 55,72 ?m/s), VAP (136,86 ± 59,38 ?m/s) e VSL (105,91 ± 41,08 ?m/s) apresentaram médias semelhantes. A oscilação (WOB) teve uma média de 78,72 ± 6,22%, enquanto a linearidade (LIN) apresentou uma média de 90,06 ± 6,76%. Além disso, a progressividade (PROG) foi de 12.767 ± 5.080 µm, e o batimento flagelar (BCF) demonstrou uma frequência inicial de 31,54 ± 5,09 Hz.